医疗耗材分子诊断中重组酶聚合酶扩增技术，RPA, recombinase polymerase amplification

 

重组酶介导的扩增技术，RAA, recombinase-aidamplification

 

重组酶，recombinase，同引物形成蛋白-核酸复合物，指导引物与模板结合，起到定位作用；帮助DNA 模板的解链和促使模板与引物之间发生链替换。

 

单链DNA结合蛋白，SSB, single stranded DNA binding。同置换出来的单链DNA结合，防止DAN配对两条链再次结合。

 

DNA聚合酶，DNA polymerase，以DNA为模板，利用dNTP合成子代DNA。

 

核酸内切酶，endonuclease，可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸。

 

Nfo，来源于细菌的核酸内切酶，且更倾向于作用于3′凹末端的双链DNA，参与DNA损伤修复。

 

 

亲水性薄膜

 

RPA和RAA的工作原理

 

相同点：

 

3种关键酶或蛋白：重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶；

在37℃恒温下进行核酸快速扩增；

 唯一不同点：酶的来源不同，推测主要时因为专利限制问题。

 

RPA的重组酶来源于T4噬菌体；

RAA的重组酶来源于细菌或者真菌。

试纸瓶

 

RPA工作原理要点：

 

1、在ATP存在条件下，重组酶与引物结合, 形成蛋白-核酸聚合体，并搜索配对目标；

 

2、当引物寻找到配对DNA模板，ATP水解供应能量，重组酶离开引物，并在DNA聚合酶的作用下合成新DNA链；

 

3、同时，单链DNA结合蛋白(singlestrandedDNA binding, SSB)同被置换出来的DNA单链进行结合，防止DNA模板再次形成双链。